Data: 7 maggio 2018 presso i laboratori dell’LBS

Classe ospitata: 25 studenti dell’I.T.E.T. A. Bassi di Lodi e del Liceo Linguistico “Sakespeare” di Crema

Docenti: Prof.ssa Roberta Carnevali, Prof.ssa Paola Cazzani

Attività di laboratorio realizzate:

• Clonaggio molecolare di un frammento di PCR
• Trasformazione di E. coli e selezione blu/bianco dei cloni ricombinanti

Nel corso della giornata gli studenti preparano una reazione di ligasi utilizzando un vettore plasmidico  e un inserto rappresentato da un DNA ribosomale di lievito (Saccharomyces cerevisiae) amplificato mediante PCR.  In seguito trasformano la miscela della reazione di ligasi in cellule competenti del ceppo di E. coli DH5alfa preparando autonomamente le piastre di terreno selettivo.

Le attività pratiche sono accompagnate da lezioni sul meccanismo dell’alfa-complementazione della beta-Galattosidasi nel ceppo di E. coli DH5alfa e sul meccanismo della trasformazione e della competenza.

I risultati dell’esperimento vengono esaminati nei giorni successivi con gli insegnanti che poi ne discutono in classe con gli studenti.

23 e 27 aprile 2018 presso il Laboratorio di Biologia Sperimentale (laboratorio didattico D2)

Classi: 3^A, 3^B – N. studenti: 39
Insegnanti: Proff. Ercoli Daniela, Manconi Eleonora

Attività: Amplificazione di DNA in vitro (PCR) – Digestione di DNA con enzimi di restrizione – Elettroforesi di DNA su gel di agarosio

PCR – Gli studenti amplificano un frammento di DNA del gene 18S rRNA di lievito (S. cerevisiae) mediante PCR.

Digestione – Il prodotto di amplificazione viene trattato con l’enzima di restrizione EcoRI

Elettroforesi – I prodotti di PCR vengono controllati su gel di agarosio prima e dopo la digestione con EcoRI

Lunedi 16 aprile 2018, ore 11:00

Liceo Scientifico Galilei di Voghera. Classi 3AS, 3Bs, 3CS, 3ASP. Docenti: BERTORELLI – GUADO. N. studenti: 84

Sede: Liceo Scientifico Galilei di Voghera, ore 11

Alla ricerca della mia “Eva” – Analisi di profili genetici individuali di DNA mitocondriale – parte seconda

Docente: prof. Luca Ferretti, Dipartimento di Biologia e Biotecnologie “L. Spallanzani”

L’attività prevede la restituzione dei dati prodotti nel corso della attività di analisi del mtDNA eseguita l’1 marzo presso l’LBS . In particolare viene fatta una lezione sul’ identificazione di aplogruppi e aplotipi genetici di DNA mitocondriale come strumento per studiare l’origine e le migrazioni delle popolazioni umane. Vengono anche illustrati e commentati i risultati del sequenziamento del DNA mitocondriale estratto e amplificato presso l’LBS dagli studenti partecipanti, con l’attribuzione degli aplotipi genetici individuali.16

Attività di promozione del laboratorio di scienze – Piano Nazionale Lauree Scientifiche

Data: 12 marzo 2018 presso il Laboratorio di Biologia Sperimentale ore 8:30 – 16:30

Classi 5^A e 5^C, Proff.sse ZAVATTONI – CORDANI. Numero studenti: 46

Attività di laboratorio realizzate:

• Clonaggio molecolare di un frammento di PCR
• Trasformazione di E. coli e selezione blu/bianco dei cloni ricombinanti

L’attività prevede la preparazione di una reazione di ligasi utilizzando un vettore plasmidico  e un inserto rappresentato da un DNA ribosomale di lievito (Saccaromyces cerevisiae) amplificato mediante PCR. Il clonaggio molecolare oggetto dell’attività è l’occasione per spiegare il meccanismo dell’alfa-complementazione della beta-Galattosidasi nel ceppo di E. coliDH5alfa.

La miscela di ligasi viene poi usata per trasformare cellule competenti del ceppo di E. coli DH5alfa su piastre di terreno per la selezione dei cloni ricombinanti (selezione “blu/bianco”).

Giovedi 1 marzo 2018 ore 9:00 – 17:30,

Liceo Scientifico Galilei di Voghera. Classi 3AS, 3Bs, 3CS, 3ASP. Docenti: BERTORELLI – GUADO. N. studenti: 84

Sede: Laboratorio di Biologia Sperimentale, Aule  D1 e D2 – Polo Didattico di Ingegneria, Via Ferrata

Alla ricerca della mia “Eva” – Analisi di profili genetici individuali di DNA mitocondriale – parte prima

Docenti: prof. Luca Ferretti e prof.ssa Edda De Rossi, Dipartimento di Biologia e Biotecnologie “L. Spallanzani”

L’attività prevede

• estrazione di DNA mediante swab buccale
• PCR della regione ipervariabile del DNA mitocondriale

L’attività sarà completata da una giornata presso il Liceo Scientifico Galilei di Voghera dove verranno illustrati i risultati del sequenziamento del DNA mitocondriale estratto e amplificato con l’attribuzione degli aplotipi genetici individuali

Colonie fluorescenti sono state lisate e il lisato è stato caricato su gel di poliacrilamide per visualizzare la proteina GFP

Da un estratto cellulare grezzo di cellule di E. coli contenenti il plasmide pGLO è stata eseguita un purificazione della proteina GFP su colonne cromatografiche

20 e 22 febbraio 2018 presso il Laboratorio di Biologia Sperimentale (laboratorio didattico D1 e D2)

Classi: 5^EC, 5^ALS e 5^BLS – N. studenti: 43
Insegnanti: Proff. Casalena Silvia, Franzini Barbara, Gobbi Mariagrazia, Mandrino Anna Maria e Vitolo Maria

Attività: Amplificazione di DNA in vitro (PCR) – Digestione di DNA con enzimi di restrizione – Elettroforesi di DNA su gel di agarosio

PCR – Gli studenti amplificano un frammento di DNA del gene 18S rRNA di lievito (S. cerevisiae) mediante PCR.

Digestione – Il prodotto di amplificazione viene trattato con l’enzima di restrizione EcoRI

Elettroforesi – I prodotti di PCR vengono controllati su gel di agarosio prima e dopo la digestione con EcoRI

Attività di promozione del laboratorio di scienze – Piano Nazionale Lauree Scientifiche

Data: 8 febbraio 2018 presso il Laboratorio di Biologia Sperimentale ore 9:00 – 17:00

Classi 5^B e 5^D, Proff.sse CUZZONI – LOGOZZO. Numero studenti: 45

Attività di laboratorio realizzate:

• Clonaggio molecolare di un frammento di PCR
• Trasformazione di E. coli e selezione blu/bianco dei cloni ricombinanti

L’attività prevede la preparazione di una reazione di ligasi utilizzando un vettore plasmidico  e un inserto rappresentato da un DNA ribosomale di lievito (Saccaromyces cerevisiae) amplificato mediante PCR. Il clonaggio molecolare oggetto dell’attività è l’occasione per spiegare il meccanismo dell’alfa-complementazione della beta-Galattosidasi nel ceppo di E. coliDH5alfa.

La miscela di ligasi viene poi usata per trasformare cellule competenti del ceppo di E. coli DH5alfa su piastre di terreno per la selezione dei cloni ricombinanti (selezione “blu/bianco”).

5 febbraio 2018 presso il Laboratorio di Biologia Sperimentale (laboratorio didattico D1 e D2)

Classi 3 D GA e  e 4 A BA ITAS Carlo Gallini: 40 studenti
Insegnanti: Proff. Galbusieri, Crispino

Attività: Clonaggio molecolare di un frammento di PCR – Estrazione e taglio di DNA di E. coli con enzimi di restrizione

Clonaggio molecolare

E’ stata preparata una reazione di ligasi utilizzando un vettore plasmidico  e un inserto rappresentato da un DNA ribosomale di lievito (S. cerevisiae) amplificato mediante PCR. Il clonaggio molecolare oggetto dell’attività è stato l’occasione per spiegare il meccanismo dell’alfa-complementazione della beta-Galattosidasi nel ceppo di E. coli DH5alfa.

La miscela di ligasi è stata usata per trasformare cellule competenti del ceppo di E. coli DH5alfa su piastre di terreno per la selezione dei cloni ricombinati (selezione “blu/bianco”).

Estrazione e taglio di DNA di E. coli con enzimi di restrizione

Il DNA di E. coli è stato estratto da una minicoltura di cellule (1 ml per studente) con una procedura basata sulla lisi delle cellule e la purificazione del DNA su colonnine. Il DNA estratto ed eluito dalle colonnnine è stato digerito con EcoRI ed HinfI e i prodotti della digestione sono stati separati su gel di agarosio

24-25 gennaio 2018 presso il Laboratorio di Biologia Sperimentale (laboratorio didattico D2)

Classe 4a Istituto Tecnico Statale – indirizzo Chimica: 16 studenti
Insegnanti: Proff. Angela Rizzo e Claudia Bottino

L’attività prevede la preparazione di una reazione di ligasi utilizzando un vettore plasmidico  e un inserto rappresentato da un DNA ribosomale di lievito (Saccaromyces cerevisiae) amplificato mediante PCR. Il clonaggio molecolare oggetto dell’attività è l’occasione per spiegare il meccanismo dell’alfa-complementazione della beta-Galattosidasi nel ceppo di E. coli DH5alfa.

La miscela di ligasi viene poi usata per trasformare cellule competenti del ceppo di E. coli DH5alfa su piastre di terreno per la selezione dei cloni ricombinati (selezione “blu/bianco”).

Il giorno dopo si valutano i risultati della trasformazione e si estrae il DNA plasmidico da colonie bianche contenenti plasmidi ricombinanti (con inserto) e da colonie blu di controllo (plasmidi senza inserto). I due tipi di plasmidi vengono caricati su gel di agarosio per visualizzare la differenza di dimensioni.

Giovedi 18 maggio ore 8:30 – 13:30

Partecipanti: 34 studenti di V (indirizzo Scienze Applicate) dell’Istituto Tecnico Industriale Statale “G. Cardano” di Pavia. Referente scolastico: Prof. Marinoni

Sede: Laboratorio di Biologia Sperimentale, Aula D1 e D2 – Polo Didattico di Ingegneria, Via Ferrata

PCR & Elettroforesi

Docenti: prof. Luca Ferretti e prof.ssa Edda De Rossi, Dipartimento di Biologia e Biotecnologie “L. Spallanzani”

L’attività prevede

• Estrazione rapida di DNA di lievito da colonia
• Amplificazione in vitro di DNA (PCR)
• Analisi dei prodotti di amplificazione mediante elettroforesi su gel di agarosio

Giovedi 27 aprile 2017 ore 14:30 – 18:00,

Sede: Laboratorio di Biologia Sperimentale, Aula D2 – Polo Didattico di Ingegneria, Via Ferrata

Alla ricerca della mia “Eva” – Analisi di profili genetici individuali di DNA mitocondriale – parte seconda

Docenti: prof. Luca Ferretti e prof.ssa Edda De Rossi, Dipartimento di Biologia e Biotecnologie “L. Spallanzani”

Settimo incontro del ciclo Approfondiamo le Biotecnologie, corso di formazione per insegnanti di Scienze e Chimica di scuole secondarie di primo e secondo grado organizzato dalla Associazione Nazionale Insegnanti Scienze Naturali – Sezione di Pavia (ANISN) con la partecipazione del DBB nel contesto del Piano Nazionale Lauree Scientifiche.

L’attività prevede

• Analisi dei risultati del sequenziamento della regione ipervariabile del DNA mitocondriale amplificata nell’attività precedente (4 aprile 2017)
• Lettura delle sequenze e generazione degli aplotipi individuali
• allineamento delle sequenze e costruzione di un albero filogenetico dei DNA mitocondriali sequenziati
• lezione sulla variabilità del mtDNA e sulla filogenesi molecolare

Martedi 4 aprile 2017 ore 14:30 – 18:00,

Sede: Laboratorio di Biologia Sperimentale, Aula D2 – Polo Didattico di Ingegneria, Via Ferrata

Alla ricerca della mia “Eva” – Analisi di profili genetici individuali di DNA mitocondriale – parte prima

Docenti: prof. Luca Ferretti e prof.ssa Edda De Rossi, Dipartimento di Biologia e Biotecnologie “L. Spallanzani”

Sesto incontro del ciclo Approfondiamo le Biotecnologie, corso di formazione per insegnanti di Scienze e Chimica di scuole secondarie di primo e secondo grado organizzato dalla Associazione Nazionale Insegnanti Scienze Naturali – Sezione di Pavia (ANISN) con la partecipazione del DBB nel contesto del Piano Nazionale Lauree Scientifiche.

L’attività prevede

• estrazione di DNA mediante swab buccale
• quantificazione del DNA estratto con fluorimetro
• PCR della regione ipervariabile del DNA mitocondriale
• lezione sulla variabilità del mtDNA con la spiegazione dei concetti di aplotipo e aplogruppo

Classe ospitata: 13 studenti delle classi 4BC, 4AC, 3G, 3F, 3O e 5C del liceo classico Verri e dell’I.T.E.T. A. Bassi di Lodi

Data: 28 marzo 2017 presso i laboratori dell’LBS

L’attività conclude il percorso laboratoriale del progetto “DNA chiavi in mano” con un’attività ci clonaggio molecolare.

Nel corso della giornata gli studenti preparano una reazione di ligasi utilizzando un vettore plasmidico  e un inserto rappresentato da un DNA ribosomale di lievito (Saccharomyces cerevisiae) amplificato mediante PCR.  In seguito trasformano la miscela della reazione di ligasi in cellule competenti del ceppo di E. coli DH5alfa preparando autonomamente le piastre di terreno selettivo.

Le attività pratiche sono accompagnate da lezioni sul meccanismo dell’alfa-complementazione della beta-Galattosidasi nel ceppo di E. coli DH5alfa e sul meccanismo della trasformazione e della competenza.

I risultati dell’esperimento vengono esaminati nei giorni successivi con gli insegnanti che poi ne discutono in classe con gli studenti.

Classe ospitata: classe 5a del Liceo Linguistico “W. Shakespeare di Crema”

Data: 21 marzo 2017 presso i laboratori dell’LBS

L’attività conclude il percorso laboratoriale del progetto “DNA chiavi in mano” con un’attività ci clonaggio molecolare.

Nel corso della giornata gli studenti preparano una reazione di ligasi utilizzando un vettore plasmidico  e un inserto rappresentato da un DNA ribosomale di lievito (Saccharomyces cerevisiae) amplificato mediante PCR.  In seguito trasformano la miscela della reazione di ligasi in cellule competenti del ceppo di E. coli DH5alfa preparando autonomamente le piastre di terreno selettivo.

Le attività pratiche sono accompagnate da lezioni sul meccanismo dell’alfa-complementazione della beta-Galattosidasi nel ceppo di E. coli DH5alfa e sul meccanismo della trasformazione e della competenza.

I risultati dell’esperimento vengono esaminati nei giorni successivi con gli insegnanti che poi ne discutono in classe con gli studenti.

Attività di promozione del laboratorio di scienze – Piano Nazionale Lauree Scientifiche per una classe 5a del Liceo Scientifico 

Data: 14 marzo presso il Laboratorio di Biologia Sperimentale ore 14:30 – 17:30

Attività di laboratorio previste:

• Digestione di DNA con enzimi di restrizione
• Elettroforesi di DNA in gel di agarosio

Durante le attività pratiche verranno spiegate le procedure  per la digestione di DNA con enzimi di restrizione  e le caratteristiche della elettroforesi mirata alla separazione di molecole di acidi nucleici

Aula D2 – Digestione EcoRI del 140317 di un frammento di rDNA di S. cerevisiae lungo 841 bp

Legenda. M = Marcatore di pesi molecolari 100 bp DNA Step Ladder (Ditta Promega), sono evidenziate le lunghezze di alcuni frammenti in bp, coppie di basi. I campioni hanno i codici delle digestioni EcoRI fatte dagli studenti; Doc, Prof. Trepolari. Nel campione 6B, più che negli altri si nota una digestione non completa. Oltre ai due prodotti finali è presente ancora un frammento più grande che corrisponde al DNA non tagliato.