ITAS Gallini (Voghera, PV) 5 febbraio 2018

5 febbraio 2018 presso il Laboratorio di Biologia Sperimentale (laboratorio didattico D1 e D2)

Classi 3 D GA e  e 4 A BA ITAS Carlo Gallini: 40 studenti
Insegnanti: Proff. Galbusieri, Crispino

Attività: Clonaggio molecolare di un frammento di PCR – Estrazione e taglio di DNA di E. coli con enzimi di restrizione

Clonaggio molecolare

E’ stata preparata una reazione di ligasi utilizzando un vettore plasmidico  e un inserto rappresentato da un DNA ribosomale di lievito (S. cerevisiae) amplificato mediante PCR. Il clonaggio molecolare oggetto dell’attività è stato l’occasione per spiegare il meccanismo dell’alfa-complementazione della beta-Galattosidasi nel ceppo di E. coli DH5alfa.

La miscela di ligasi è stata usata per trasformare cellule competenti del ceppo di E. coli DH5alfa su piastre di terreno per la selezione dei cloni ricombinati (selezione “blu/bianco”).

Estrazione e taglio di DNA di E. coli con enzimi di restrizione

Il DNA di E. coli è stato estratto da una minicoltura di cellule (1 ml per studente) con una procedura basata sulla lisi delle cellule e la purificazione del DNA su colonnine. Il DNA estratto ed eluito dalle colonnnine è stato digerito con EcoRI ed HinfI e i prodotti della digestione sono stati separati su gel di agarosio