Liceo G. Galilei, Voghera – 22 Febbraio 2019

Attività di promozione del laboratorio di scienze – Piano Nazionale Lauree Scientifiche

 Data: 22 febbraio 2019 presso il Laboratorio di Biologia Sperimentale ore 8:30 – 16:30

Classi 5A e 5B (Proff. Bertorelli e Montagna)

Numero studenti: 43

Attività di laboratorio realizzate:

  • Clonaggio molecolare di un frammento di PCR
  • Trasformazione di E. coli e selezione blu/bianco dei cloni ricombinanti
  • Purificazione della proteina GFP (Green Fluorescent Protein)

L’attività prevede la preparazione di una reazione di ligasi utilizzando un vettore plasmidico  e un frammento di DNA ribosomale di lievito (Saccharomyces cerevisiae) amplificato mediante PCR. Il clonaggio molecolare oggetto dell’attività è l’occasione per spiegare il meccanismo dell’alfa-complementazione della beta-Galattosidasi nel ceppo di E. coli DH5alfa.

La miscela di ligasi viene poi usata per trasformare cellule competenti del ceppo di E. coli DH5alfa su piastre di terreno per la selezione dei cloni ricombinanti (selezione “blu/bianco”). Il lavoro è completata dagli insegnanti che ritirano le piastre delle trasformazioni e le portano in classe per la valutazione dei risultati della trasformazione con gli studenti.

L’ultima attiviità prevede la purificazione, a aprtire da un estratto cellulare di E. coli, della proteina GFP (Green Fluorescent Protein) mediante cromatografia ad interazione idrofobica.