Istituto d’Istruzione Superiore Borghese-Faranda (PATTI, ME) – 14, 15 Marzo 2019

Data: 14-15 marzo 2019 presso il Laboratorio di Biologia Sperimentale (laboratorio didattico D1)

Classe 4 Istituto Tecnico Statale – indirizzo Chimica: 22 studenti

Insegnanti: Proff. Francesca Buta e Enza Stroscio

L’attività prevede la preparazione di una reazione di ligasi utilizzando un vettore plasmidico  e un inserto rappresentato da un DNA ribosomale di lievito (Saccaromyces cerevisiae) amplificato mediante PCR. Il clonaggio molecolare oggetto dell’attività è l’occasione per spiegare il meccanismo dell’alfa-complementazione della beta-galattosidasi nel ceppo di E. coli DH5alfa.

La miscela di ligasi viene poi usata per trasformare cellule competenti del ceppo di E. coli DH5alfa su piastre di terreno per la selezione dei cloni ricombinati (selezione “blu/bianco”).

Il giorno dopo si valutano i risultati della trasformazione e si estrae il DNA plasmidico da colonie bianche contenenti plasmidi ricombinanti (con inserto) e da colonie blu di controllo (plasmidi senza inserto). I due tipi di plasmidi vengono caricati su gel di agarosio per visualizzare la differenza di dimensioni.